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使用液相色譜進(jìn)行定量分析時(shí)常采用哪種方法?

更新時(shí)間:2022-10-12        閱讀:2843
標(biāo)準(zhǔn)曲線法,分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。外標(biāo)法在液相色譜中用的較多。內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確但是麻煩,在標(biāo)準(zhǔn)方法中用的較多。

1、外標(biāo)法
用被測化合物的純品作為標(biāo)準(zhǔn)樣品,配制成一系列的已知濃度的標(biāo)樣。注入色譜柱的到其響應(yīng)值(峰面積)。
在一定范圍內(nèi),標(biāo)樣的濃度與響應(yīng)值之間存在較好的線性關(guān)系,即W=f×A,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在*相同的實(shí)驗(yàn)條件下,注入未知樣品,得到欲測組分的響應(yīng)值。根據(jù)已知的系數(shù)f,即可求出欲測組分的濃度。
外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn):
操作、計(jì)算簡單,是一種常用的定量方法;無需各組分都被檢出、洗脫;需要標(biāo)樣;標(biāo)樣及未知樣品的測定條件要一致;進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。
外標(biāo)法缺點(diǎn):
實(shí)驗(yàn)條件要求高,如檢測器的靈敏度,流速、流動相組成的不能發(fā)生變化;每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性。
 
2、內(nèi)標(biāo)法
操作:
將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品,制成混合標(biāo)樣,并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣?;旌蠘?biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。注入色譜柱,以(標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積)為響應(yīng)值。根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系,即W=f×A,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品,注入色譜柱,得到欲測組分的響應(yīng)值。根據(jù)已知的系數(shù)f,即可求出欲測組分的濃度。
內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn):
操作過程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的,因此只要混合溶液中被測組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定,上樣體積的變化不會影響影響定量結(jié)果。內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積,乃至流動相、檢測器的影響,因此比外標(biāo)法精確。

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