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液相色譜分析柱在使用前和使用時都注意些,可避免麻煩

更新時間:2021-11-03        閱讀:1888
  現(xiàn)在流行兩種主要的液相色譜分析柱的式樣,關(guān)鍵部件卡套有些不同。一種式樣是螺母、卡套全套在柱管上,分配器和燒結(jié)過濾板按順序放在尾部接頭內(nèi)。擰緊螺母和尾部接頭,卡套一次成型緊緊咬住柱管外壁,起到很好的密封作用。分配器使得高壓流動相不集中在一點沖擊柱床,又能把由流動相帶來的樣品分散到柱頭上均勻分離,形成對稱的色譜峰。燒結(jié)過濾板的孔徑<5微米,除了能緩和高壓流動相對固定相的沖擊,也擋住了污染物進入色譜柱柱頭。
 
  液相色譜分析柱在使用前,需要進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是好的條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。具體有以下3點:
 
  1、樣品的前處理:
 
  a、至好使用流動相溶解樣品。
 
  b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
 
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
 
  2、流動相的配制:
 
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
 
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
 
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
 
  3、流動相流速的選擇:
 
  因液相色譜分析柱是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求更好的柱效,使用合適流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
 
  在使用液相色譜分析柱時,多注意使用注意事項可以避免一些不必要的麻煩,進而提高實驗人員的工作效率,比較主要的有以下6點:
 
  1、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
 
  有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
 
  2、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
 
  在進行清洗時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
 
  3、保存色譜柱
 
  應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
 
  4、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動
 
  溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此,在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
 
  5、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成
 
  特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?br /> 
  6、一般說來色譜柱不能反沖
 
  只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
 

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